多肽合成是氨基酸重復(fù)添加的過程，通常從C端向N端(氨基端)進(jìn)行合成。多肽固相合成的原理是將目的肽的第一個(gè)氨基酸C端通過共價(jià)鍵與固相載體連接，再以該氨基酸N端為合成起點(diǎn)，經(jīng)過脫去氨基保護(hù)基和過量的已活化的第二個(gè)氨基酸進(jìn)行反應(yīng)，接長(zhǎng)肽鏈，重復(fù)操作，達(dá)到理想的合成肽鏈長(zhǎng)度，最后將肽鏈從樹脂上裂解下來，分離純化，獲得目標(biāo)多肽。
 

　　1、Boc多肽合成法
 

　　Boc方法是經(jīng)典的多肽固相合成法，以Boc作為氨基酸α-氨基的保護(hù)基，芐醇類作為側(cè)鏈保護(hù)基，Boc的脫除通常采用三(TFA)進(jìn)行。多肽合成時(shí)將已用Boc保護(hù)好的N-α-氨基酸共價(jià)交聯(lián)到樹脂上，TFA切除Boc保護(hù)基，N端用弱堿中和。
 

　　肽鏈的延長(zhǎng)通過二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)活化、偶聯(lián)進(jìn)行，最終采用強(qiáng)酸氫氟酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)將合成的目標(biāo)多肽從樹脂上解離。在Boc多肽合成法中，為了便于下一步的多肽合成，反復(fù)用酸進(jìn)行脫保護(hù)，一些副反應(yīng)被帶入實(shí)驗(yàn)中，例如多肽容易從樹脂上切除下來，氨基酸側(cè)鏈在酸性條件不穩(wěn)定等。
 

　　2、Fmoc多肽合成法
 

　　Carpino和Han以Boc多肽合成法為基礎(chǔ)發(fā)展起來一種多肽固相合成的新方法——Fmoc多肽合成法。
 

　　Fmoc多肽合成法以Fmoc作為氨基酸α-氨基的保護(hù)基。其優(yōu)勢(shì)為在酸性條件下是穩(wěn)定的，不受TFA等試劑的影響，應(yīng)用溫和的堿處理可脫保護(hù)，所以側(cè)鏈可用易于酸脫除的Boc保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。
 

　　肽段的最后切除可采用TFA/二氯甲烷(DCM)從樹脂上定量完成，避免了采用強(qiáng)酸。同時(shí)，與Boc法相比，F(xiàn)moc法反應(yīng)條件溫和，副反應(yīng)少，產(chǎn)率高，并且Fmoc基團(tuán)本身具有特征性紫外吸收，易于監(jiān)測(cè)控制反應(yīng)的進(jìn)行。Fmoc法在多肽固相合成領(lǐng)域應(yīng)用越來越廣泛。
 

　　3、多肽液相分段合成
 

　　隨著多肽合成的發(fā)展，多肽液相分段合成(即多肽片段在溶液中依據(jù)其化學(xué)專一性或化學(xué)選擇性，自發(fā)連接成長(zhǎng)肽的合成方法)在多肽合成領(lǐng)域中的作用越來越突出。其特點(diǎn)在于可以用于長(zhǎng)肽的合成，并且純度高，易于純化。
 

　　多肽液相分段合成主要分為天然化學(xué)連接和施陶丁格連接。天然化學(xué)連接是多肽分段合成的基礎(chǔ)方法，局限在于所合成的多肽必須含半光氨酸(Cys)殘基，因而限定了天然化學(xué)連接方法的應(yīng)用范圍。天然化學(xué)連接方法的延伸包括化學(xué)區(qū)域選擇連接、可除去輔助基連接、光敏感輔助基連接。
 

　　施陶丁格連接方法是另一種基礎(chǔ)的片段連接方法，其為多肽片段連接途徑開拓了更廣闊的思路。正交化學(xué)連接方法是施陶丁格連接方法的延伸，通過簡(jiǎn)化膦硫酯輔助基來提高片段間的縮合率。